Начало активности флураланера в отношении блохи кошачьей (Ctenocephalides felis) у собак

Общие сведения

Кошачьи блохи Ctenocephalides felis – это основной вид блох, поражающий собак и кошек [1] и наиболее значимый эктопаразит собак во многих регионах мира [2]. При отсутствии лечения животные, являющиеся хозяевами блох в течение длительного времени, могут страдать от интенсивного зуда, наносить себе повреждения кожных покровов и даже, в случае массивного заражения, страдать от анемии [2]. У некоторых собак контакт с блохами вызывает более серьезное состояние – блошиный аллергический дерматит (БАД), вызванный гиперчувствительностью к компонентам блошиной слюны [1]. При возникновении сенсибилизации для рецидива характерных для этого состояния очагов поражений достаточно лишь нескольких укусов блох. Клинические симптомы заболевания носят, как правило, транзиторный характер. Однако если популяцию блох не уничтожить, могут наблюдаться хронические изменения кожных покровов, такие как алопеция, образование струпа, гиперпигментация и лихенизация [3]. Собак поражают исключительно взрослые особи блох. В ходе остальных стадий жизненного цикла блох имеет место контаминация их жизненной среды, т.е. развитие особей через стадии личинок и куколок. Уничтожение взрослых особей блох до того, как они начнут откладывать яйца, имеет большое значение для успешной борьбы с блохами [4]. Между первой порцией крови, насасываемой блохой, и началом откладывания яиц проходит примерно 24 часа [1]. Таким образом, необходимо в течение вышеупомянутого промежутка времени эффективно уничтожить всех взрослых особей блох.

Действующее вещество флураланер принадлежит к классу изоксазолинов – новому классу противопаразитарных препаратов, ингибирующих хлоридные каналы, активируемые гамма-аминомасляной кислотой (ГАМК) и глутаматом, обладая при этом значительной селективностью в отношении нейронов насекомых в сравнении с нейронами млекопитающих [5,6]. Флураланер выпускается в виде ароматизированных жевательных таблеток, доступных в продаже в качестве препарата для немедленного и долгосрочного (на протяжении 12 недель) уничтожения клещей и блох собак, который оказывает основное действие при кровососании [7]. В ходе полевых испытаний однократное введение флураланера обеспечивало активность в отношении блох у собак на протяжении 12 недель [8]; кроме этого, препарат характеризовался высокой безопасностью и хорошей переносимостью [8,9].

Настоящее исследование преследует следующие цели: a) определить, насколько быстро флураланер начинает уничтожать блох (в течение 0,5-4 часов после введения препарата) и б) установить скорость уничтожения блох в течение 4–24 часов после заражения и на протяжении всего срока действия флураланера длительностью 12 недель.

Методы

Дизайн исследования

Были проведены три слепых рандомизированных исследования с негативным контролем – одно для определения времени до начала уничтожения паразитов (в ЮАР) и два исследования скорости уничтожения паразитов (в Германии). Исследование времени до начала уничтожения паразитов проводилось в соответствии с Надлежащей клинической практикой (руководство Международного сотрудничества по гармонизации технических требований для регистрации ветеринарных средств (VICH) GL9, Надлежащая клиническая практика, Европейское агентство по лекарственным средствам, 2000) и Национальным стандартом ЮАР «SANS 10386:2008: Содержание и использование животных в научных целях»; перед началом исследования было получено разрешение Комитета по этике обращения с животными в клинической ветеринарии (CAEC). 2 исследования скорости уничтожения паразитов проводились согласно Принципам надлежащей лабораторной практики (GLP) ОЭСР и принципам GLP, изложенным в «Законе о химических веществах» (Chemikaliengesetz) Германии, также в соответствии с нормативно-правовыми актами ФРГ по защите прав животных; перед началом исследования было получено одобрение Комитета по этике.

Каждая временная точка оценки наличия блох в рамках каждого из трех исследований предусматривала наличие 6 собак, получивших препарат, и 6 контрольных животных, что составило в общей сложности 96 собак (52 самца и 44 самки). Все включенные в исследование собаки были 6-месячного возраста, весили от 8,9 до 18,8 кг и были смешанной или чистой породы (бигль). Состояние здоровья всех собак было хорошим; животные не получали каких-либо противопаразитарных препаратов в течение 3 месяцев, предшествующих 7-дневному периоду акклиматизации; каждое животное было отмечено уникальным номером при помощи микрочипа. Во всех исследованиях (времени до начала уничтожения паразитов и скорости уничтожения паразитов) использовались выращенные в лабораторных условиях линии блох, в обоих случаях — из Германии, собранные в природных условиях менее чем за 10 лет до начала исследований.

В ходе периода акклиматизации восприимчивость каждой собаки к блохам была подтверждена посредством заражения 100 (±4) блохами (времени до начала уничтожения паразитов) или 80 блохами (исследования скорости уничтожения паразитов) с последующим удалением и подсчетом блох спустя 24 (±2) часа. Все включенные в исследование собаки имели на себе более 50 % исходного количества блох, которыми они были инфицированы. Собаки были ранжированы в порядке уменьшения количества блох отдельно по полу (исследование времени до начала уничтожения паразитов) или без разделения по полу (исследования скорости уничтожения паразитов) и случайным образом распределены по группам с помощью сгенерированного на компьютере рандомизационного списка. В ходе исследования времени до начала уничтожения паразитов собак с самого начала расселяли отдельно. В ходе исследований скорости уничтожения паразитов собак из одной группы исследования селили вместе в период, предшествующий заражению блохами. В день заражения блохами собак расселяли в отдельные клетки.

Лечение

За один или 2 дня до введения препарата каждое животное инфицировали голодными взрослыми блохами вида C. felis в количестве 100 (±4) (исследование времени до начала уничтожения паразитов) или 80 (исследования скорости уничтожения паразитов). В день применения препарата (день 0) каждая собака получила половину суточного рациона корма приблизительно за 20 мин до введения препарата, а остальную часть — сразу после этого. Собаки в экспериментальных группах получили жевательные таблетки флураланера, исходя из массы тела конкретного животного и минимальной дозы флураланера, составляющей 25 мг/кг массы тела. Жевательная таблетка вводилась путем помещения ее в задней части ротовой полости, над языком (для стимуляции глотательного рефлекса). В течение 1 часа после введения препарата за каждой получившей его собакой непрерывно наблюдали, чтобы она не вырвала или не выплюнула таблетку; ни в одном из трех исследований таких случаев не было. Собаки из контрольной группы какого-либо лечения не получали. Состояние здоровья животных оценивалось ежедневно на протяжении всего периода исследования в рамках всех 3 исследований.

Заражение блохами и оценка количества блох

В ходе исследование времени до начала уничтожения паразитов все собаки были инфицированы 100 (±4) блохами за 1 день до применения препарата. Подсчет количества блох производился в паре из одной контрольной и одной экспериментальной группе через 0,5 часа (±5 мин), 1 час (±15 мин), 2 часа (±15 мин) или 4 часа (±15 мин) после введения флураланера. В рамках двух исследований скорости уничтожения паразитов собак инфицировали 80 блохами в дни −2, 28 (4 недели), 56 (8 недель) и 84 (12 недель). Подсчет количества блох проводили в одной паре экспериментальной и контрольной группы через 4 и 8 (±0,75) часов (в рамках одного исследования) или через 12 и 24 (±1,5) часа (в ходе другого исследования) после введения флураланера (неделя 0) или после каждого повторного инфицирования блохами (недели 4, 8 и 12). Для удаления и подсчета живых взрослых блох каждую собаку тщательно расчесывали. Сотрудники, проводившие подсчет количества полученных в результате расчесывания блох, не имели доступа к информации о том, к какой группе принадлежало каждое животное.

Оценка эффективности

В ходе всех статистических расчетов в качестве статистической единицы служила отдельная собака. Данные, полученные для каждой временной точки подсчета блох, анализировали отдельно. По сравнению с контрольной группой, наблюдались значимые отличия логарифма числа живых блох в каждой получившей препарат группе в каждой временной точке, в которой проводилась оценка. Сравнение групп проводилось при помощи смешанной линейной модели, в которой параметр «группа исследования» выступал в качестве фиксированного эффекта, а параметр «блок» — в качестве случайного эффекта. Критерием наличия двустороннего уровня значимости было принято значение P ≤ 0,05 (полученное при помощи программного обеспечения компании SAS Institute Inc., Cary, NC, США, релиз 9.2).

Для расчета эффективности использовалось среднее геометрическое, полученное по формуле Эбботта:

Эффективность (%) = 100 x (M_C – M_T)/M_C, где M_C – среднее общее число взрослых живых блох на собаках, не получавших препарат, а M_T – среднее общее число взрослых живых блох на собаках, получивших препарат. Если число блох было равно нулю, среднее геометрическое (количества блох) рассчитывалось следующим образом:

Результаты

Ни у одной из собак не наблюдалось нежелательных явлений, которые были бы связаны с пероральным применением флураланера.

В ходе исследования времени до начала уничтожения паразитов (см. таблицу 1) активность флураланера в отношении блох проявлялась уже через 1 час после применения препарата (оценка численной эффективности – 8 %). Значимое снижение числа блох наблюдалось через 2 и через 4 часа (эффективность 36,7 % и 88 %). Через 4 часа после применения препарата у одной собаки блохи исчезли, а у трех собак обнаружили ≤ 6 блох.

В ходе исследований скорости уничтожения паразитов (см. таблицу 2) показатели эффективности в отношении блох составили после введения флураланера 80,5 % через 4 часа, а через 8, 12 и 24 часов оставались на уровне ≥ 99,4 %.

Показатель эффективности препарата через 4 часа после повторных заражений блохами на 4-й, 8-й и 12-й неделе составил, соответственно, 96,8, 91,4 и 33,5 %. Показатель эффективности через 8, 12 и 24 часов после повторных заражений блохами составил на протяжении 12 недель исследования 98,0-100 %.

В этих временных точках обнаруживали лишь единичных блох на собаках или полное отсутствие блох. За исключением временной точки «4 часа после заражения блохами на 12-й неделе», снижение количества блох носило достоверный характер для всех временных точек после лечения и для повторных заражений.

Таблица 1. Исследование времени до начала уничтожения паразитов: среднее число блох, диапазон значений числа блох и процент эффективности через 0,5, 1, 2 и 4 часа после однократного перорального введения флураланера у собак

^a Геометрическое среднее.

^b Значение логарифма числа живых блох в группе, получившей препарат, значимо отличалось (p ≤ 0,05) от аналогичного показателя в соответствующей контрольной группе, не получавшей препарат.

Обсуждение

Флураланер – это первое пероральное средство от эктопаразитов с доказанной эффективностью в отношении блох в течение более 12 недель [7]. Результаты, полученные в ходе исследования времени до начала уничтожения паразитов, свидетельствуют о том, что флураланер начинает уничтожать находящихся на собаке блох уже через 1 час после перорального введения. Через 4 часа после применения препарата было уничтожено 88 %, а через 8 часов – 99,4 % блох. Столь убедительная эффективность, наблюдавшаяся через 8 часов после применения препарата, сохранялась на протяжении всех 12 недель после его введения. Эти результаты согласовываются с почти 100 % эффективностью препарата, наблюдавшейся в ходе проводившегося в Европе полевого испытания в различных его временных точках [8]. В ходе вышеупомянутого полевого испытания группа, получавшая фипронил, характеризовалась более низкими показателями эффективности во всех временных точках; вследствие этого для достижения эффективности, сопоставимой с однократным применением флураланера, потребовалось применять препарат несколько раз (ежемесячно). Выраженная эффективность флураланера в отношении блох, проявляющаяся уже через 8 часов и длящаяся не менее 12 недель после его применения, способствует уменьшению блошиной популяции в окружающей среде посредством постепенного уничтожения блох

Таблица 2. Исследование скорости уничтожения паразитов: среднее число блох, размах значений числа блох и процент эффективности на протяжении 12 недель после однократного перорального введения флураланера у собак

^a Оценка зависимости числа блох от времени (ч) после применения препарата или после повторного заражения блохами на протяжении периода действия препарата.

^b Среднее геометрическое.

^c Значение логарифма числа живых блох в группе, получившей препарат, значимо отличалось (p ≤ 0,05) от аналогичного показателя в соответствующей контрольной группе, не получавшей препарат.

на конечной стадии развития. Самки блох начинают откладывать яйца через 24–48 часов после начала кровососания, которое играет важную роль в процессе образования и созревания блошиных яиц [10]. Уничтожая на протяжении длительного срока (12 недель) всех только что появившихся взрослых блох до того, как они начнут откладывать яйца, мы тем самым прерываем жизненный цикл блохи, т.е. не даем появиться на кожно-волосяных покровах собаки личинкам, куколкам и новым взрослым особям. Долгосрочная эффективность в отношении блох подкрепляется дополнительным влиянием на репродуктивные процессы у блох, поскольку флураланер напрямую подавляет развитие куколок и, таким образом, препятствует появлению новых взрослых особей блох [11]. Таким образом, лечение флураланером не только приводит к уничтожению существующей популяции блох у конкретного животного, но и способствует прерыванию жизненного цикла блохи и, таким образом, искоренению блох в ареале их обитания. Благодаря тому, что флураланер начинает действовать быстрее, возможность укусить животное имеет меньшее число блох, что способствует профилактике БАД [8], часто даже устраняя необходимость в дальнейшей сопутствующей терапии [неопубликованные наблюдения]. Распространенная причина неудовлетворительной результативности лечения эктопаразитов у собак – несоблюдение их владельцами протоколов применения существующих противоэктопаразитарных препаратов, требующих введения повторных доз раз в месяц [12,13]. Несоблюдение владельцами животных правил применения этих препаратов может также приводить к появлению резистентных блох в популяции, поскольку тем самым особям, у которых развилась невосприимчивость к инсектицидам, предоставляется возможность выжить [13]. Продолжительный интервал повторного введения препарата и лучшее соблюдение владельцем животного графика его применения способствуют снижению вероятности развития резистентности. Таким образом, применение действующего вещества с продолжительным интервалом повторного введения, такого как флураланер, позволяет достичь большего эффекта в уничтожении блох.

Выводы

После однократного перорального введения флураланера собакам в виде жевательной таблетки, процесс уничтожения блох начинается уже через 1 час; эффективность в отношении блох составляет 98-100 % – через 8 часов после применения препарата или в случае повторного заражения на протяжении всего 12-недельного периода действия препарата. Флураланер эффективно уничтожает блох в течение нескольких часов после заражения, чем способствует прерыванию жизненного цикла блохи и, соответственно, снижению популяцию блох в окружающей среде. Препарат также способствует профилактике и лечению БАД. Более длительный интервал повторного применения флураланера значительно удобнее схем с ежемесячным применением препаратов против блох, что обуславливает его вероятное преимущество в плане лучшего соблюдения владельцами животных графика лечения.

Конфликт интересов

Автор JF является сотрудником компании ClinVet, а все остальные авторы данной статьи являются сотрудниками компании MSD Animal Health. Эти исследования проводились в контексте более крупной программы исследований, посвященной оценке безопасности и эффективности флураланера для лечения поражения блохами и клещами у собак и кошек.

Личный вклад авторов

Дизайн и протокол данного исследования, а также отчет по его результатам подготовлены авторами JT, AH, RR и JF. Автор JF и его коллеги в компании ClinVet SA отвечали за фазу проведения исследований на животных и сбор данных, а EZ – за статистическую обработку данных. Дизайн и протокол данного исследования, а также отчет по 2 исследованиям скорости уничтожения паразитов подготовили авторы CW, HW, AH и RR. Исследование было проведено на базе компании MSD Animal Health; автор EZ провел статистические расчеты. Все авторы изучили и утвердили окончательную версию.

Выражение признательности

Авторы статьи хотели бы выразить благодарность всем сотрудникам компаний MSD Animal Health и ClinVet SA за их помощь и вклад в проведении этих исследований.

Author details

1MSD Animal Health Innovation GmbH, Zur Propstei, 55270 Schwabenheim, Germany (Германия).² ClinVet International, Uitsigweg, Bainsvlei, 9338

Bloemfontein, Free State, South Africa (ЮАР).

Received: 24 July 2014 Accepted: 24 November 2014

Published: 4 December 2014